Разработка методики получения культуры перитубулярных миоидных клеток для создания экспериментальной модели изучения свойств клеток in vitro
Аннотация
В рамках данной работы была проанализирована научная литература по культурам клеток млекопитающих, клеточным технологиям, свойствам и функциям перитубулярных миоидных клеток и их вовлеченности в регуляцию сперматогенеза и иммунной толерантности семенников. После был составлен дизайн исследования. Проведено исследование, посвященное разработке методики, позволяющей выделять перитубулярные миоидные клетки из семенников и получать чистую культуру перитубулярных миоидных клеток. В культуре были изучены свойства данных клеток на разных временных промежутках жизни культуры клеток. Полученная культура перитубулярных миоидных клеток – первичная нормальная монослойная культура, на 7 сутки переходящая в клеточную линию с 1-м пассажем, живет 30 суток. Данная культура подходит для кратковременных исследований и использования ее в качестве экспериментальной модели. При разработке методики получения культуры ПМК выделены наиболее успешные манипуляции: состав питательной среды:RPMI, 10 % фетальной телячьей сыворотки, 1 % антибиотика; ферментация: 1 этап - трипсин-ДНКаза (0,25 мг/мл и 1 мг/мл) 15 мин, 37 °С, 2 этап - коллагеназа-ДНКаза (1 мг/мл и 1 мг/мл) 15 мин, 37 °С; центрифугирование 5 мин, 400 g.
The scientific literature on mammalian cell cultures, cell technologies, functions of peritubular myoid cells and their involvement in the regulation of spermatogenesis and immune tolerance of the testes was analyzed in this scientific work. A study was conducted on the development of a technique that allows isolating peritubular myoid cells from the testes and obtaining a culture of peritubular myoid cells. In culture, the properties of these cells were studied at different time intervals of the life of the cell culture. The resulting culture of peritubular myoid cells is a primary normal monolayer culture, which on the 7th day turns into a cell line with the 1st passage, lives for 30 days. This culture is suitable for short-term studies and its use as an experimental model. When developing a technique for obtaining a PMC culture, the most successful manipulations were identified: the composition of the nutrient medium: RPMI, 10 % fetal calf serum, 1 % antibiotic; fermentation: stage 1 - trypsin-DNase (0.25 mg/ml and 1 mg/ml) 15 min, 37 °C, stage 2 - collagenase-DNase (1 mg/ml and 1 mg/ml) 15 min, 37 °C; centrifugation 5 min, 400 g.
The scientific literature on mammalian cell cultures, cell technologies, functions of peritubular myoid cells and their involvement in the regulation of spermatogenesis and immune tolerance of the testes was analyzed in this scientific work. A study was conducted on the development of a technique that allows isolating peritubular myoid cells from the testes and obtaining a culture of peritubular myoid cells. In culture, the properties of these cells were studied at different time intervals of the life of the cell culture. The resulting culture of peritubular myoid cells is a primary normal monolayer culture, which on the 7th day turns into a cell line with the 1st passage, lives for 30 days. This culture is suitable for short-term studies and its use as an experimental model. When developing a technique for obtaining a PMC culture, the most successful manipulations were identified: the composition of the nutrient medium: RPMI, 10 % fetal calf serum, 1 % antibiotic; fermentation: stage 1 - trypsin-DNase (0.25 mg/ml and 1 mg/ml) 15 min, 37 °C, stage 2 - collagenase-DNase (1 mg/ml and 1 mg/ml) 15 min, 37 °C; centrifugation 5 min, 400 g.