Методологические аспекты проведения микроманипуляций с клетками различных культур
Аннотация
Цель работы – изучение методологических аспектов проведения микроманипуляций с клетками различных культур.
Для проведения микроманипуляционных работ по трансплантации части цитоплазмы и ядра был изготовлен набор микроинструментов удерживающего и инъекционного типа, а также осуществлен подбор клеточных линий среди следующих культур: трансформированные фибробласты крысы линии К-22, альвеолярные и перитонеальные макрофаги крысы, клетки почки эмбриона человека Hek-293, фибробласты кожи человека и клетки линии Hela. В качестве объекта исследования были выбраны фибробласты кожи человека и клетки Hela, поскольку наряду с четко выраженной морфологией, они имеют низкое значение ядерно-цитоплазматического отношения.
Перед проведением непосредственной пересадки ядра и части цитоплазмы был проведен анализ ответной реакции клеток на контакт с кончиками микроинструментов.
По полученным данным установлено, что фибробласты при касании инъекционной микропипеткой без шипа отвечают сжатием. Тенденции к восстановлению их размеров в течение 30 минут не наблюдается. При касании шипом происходит изменение формы клеток, а также значительное уменьшение их размеров, возможно, вследствие нанесения нерепарируемой перфорации. Аналогичные изменения наблюдали у клеток Hela. Выявлено, что индекс жизнеспособности клеток через 12 часов после контакта с шипом ниже, чем у клеток в контроле и при воздействии инъекционной микропипеткой без шипа. В связи с этим, с точки зрения выживаемости клеток, для проведения микроманипуляций использование микроинструментов с шипом не является приемлемым.
Было выявлено, что фибробласты проявляют высокую гибкость на введение микроинструмента в их полость, а клетки Hela подвержены сильному растяжению мембраны.
Вследствие деструкции клеток из-за низкой устойчивости к воздействию микроинструментов удалить из их полости ядро не представляется возможным. Руководствуясь полученными данными и данными литературы, были предложены некоторые пути решения выявленных проблем и рекомендации для успешной трансплантации. Так, в первую очередь необходимо решить проблему контаминации среды, например, используя микрокамеру. Также необходимо опробовать технологию микроманипуляций с другими культурами клеток, имеющими более крупные размеры.
Для проведения микроманипуляционных работ по трансплантации части цитоплазмы и ядра был изготовлен набор микроинструментов удерживающего и инъекционного типа, а также осуществлен подбор клеточных линий среди следующих культур: трансформированные фибробласты крысы линии К-22, альвеолярные и перитонеальные макрофаги крысы, клетки почки эмбриона человека Hek-293, фибробласты кожи человека и клетки линии Hela. В качестве объекта исследования были выбраны фибробласты кожи человека и клетки Hela, поскольку наряду с четко выраженной морфологией, они имеют низкое значение ядерно-цитоплазматического отношения.
Перед проведением непосредственной пересадки ядра и части цитоплазмы был проведен анализ ответной реакции клеток на контакт с кончиками микроинструментов.
По полученным данным установлено, что фибробласты при касании инъекционной микропипеткой без шипа отвечают сжатием. Тенденции к восстановлению их размеров в течение 30 минут не наблюдается. При касании шипом происходит изменение формы клеток, а также значительное уменьшение их размеров, возможно, вследствие нанесения нерепарируемой перфорации. Аналогичные изменения наблюдали у клеток Hela. Выявлено, что индекс жизнеспособности клеток через 12 часов после контакта с шипом ниже, чем у клеток в контроле и при воздействии инъекционной микропипеткой без шипа. В связи с этим, с точки зрения выживаемости клеток, для проведения микроманипуляций использование микроинструментов с шипом не является приемлемым.
Было выявлено, что фибробласты проявляют высокую гибкость на введение микроинструмента в их полость, а клетки Hela подвержены сильному растяжению мембраны.
Вследствие деструкции клеток из-за низкой устойчивости к воздействию микроинструментов удалить из их полости ядро не представляется возможным. Руководствуясь полученными данными и данными литературы, были предложены некоторые пути решения выявленных проблем и рекомендации для успешной трансплантации. Так, в первую очередь необходимо решить проблему контаминации среды, например, используя микрокамеру. Также необходимо опробовать технологию микроманипуляций с другими культурами клеток, имеющими более крупные размеры.