Разработка и синтез олигонуклеотидных праймеров и зонда для обнаружения РНК метапневмовируса человека методом ПЦР-РВ
Аннотация
Работа посвящена разработке диагностической системы, состоящей из олигонукле-отидных праймеров и зонда TaqMan, для обнаружения метапневмовируса человека мето-дом ПЦР в режиме реального времени. Участки гена N, выбранные в качестве сайтов свя-зывания, консервативны и специфичны для исследуемого вируса. Приведено описание синтеза разработанных олигонуклеотидов твердофазным амидофосфитным способом. Ла-бораторными методами подтверждено, что полученная диагностическая система дает сиг-нал и детектирует метапневмовирус человека в суспензиях клеток. Неспецифические ре-акции на нецелевые вирусы: человеческие аденовирус, риновирус и респираторно-синцитиальный вирус – отсутствуют. Разработанная система является перспективной для обнаружения метапневмовируса человека в диагностических и исследовательских целях.
The work is devoted to the development of a diagnostic system consisting of oligonucleo-tide primers and a TaqMan probe for the detection of human metapneumovirus by real-time PCR. The regions of the N gene selected as binding sites are conservative and specific to the virus. The description of the synthesis of the developed oligonucleotides by solid-phase amidophosphite method is provided. Laboratory methods have confirmed that the received diagnostic system gives a signal and detects human metapneumovirus in cell suspensions. There are no non-specific reactions to non-target viruses: human adenovirus, rhinovirus and respiratory syncytial virus. The developed system is promising for the detection of human metapneumovirus for diagnostic and research purposes.
The work is devoted to the development of a diagnostic system consisting of oligonucleo-tide primers and a TaqMan probe for the detection of human metapneumovirus by real-time PCR. The regions of the N gene selected as binding sites are conservative and specific to the virus. The description of the synthesis of the developed oligonucleotides by solid-phase amidophosphite method is provided. Laboratory methods have confirmed that the received diagnostic system gives a signal and detects human metapneumovirus in cell suspensions. There are no non-specific reactions to non-target viruses: human adenovirus, rhinovirus and respiratory syncytial virus. The developed system is promising for the detection of human metapneumovirus for diagnostic and research purposes.