Разработка и оптимизация условий постановки диагностической полимеразной цепной реакции для детекции точковых мутаций в гене TBX1
Аннотация
Работа посвящена разработке и оптимизации условий проведения полимеразной цепной реакции для амплификации целевых участков гена TBX1. Исследование выполнено на образцах ДНК, выделенной из цельной крови пациентов с помощью роботизированной системы для выделения и очистки нуклеиновых кислот.
Показано, что специфичная температура отжига праймеров, применение двухстадийного протокола реакции с увеличенным временем элонгации и денатурации цепи положительно влияют на специфичность реакции в отношении 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9С и 10 экзонов гена. Обнаружено, что замена Taq-полимеразы на Pfu-полимеразу, добавление ДМСО не приводит к амплификации 7–8 экзонов гена TBX1.
Показано, что специфичная температура отжига праймеров, применение двухстадийного протокола реакции с увеличенным временем элонгации и денатурации цепи положительно влияют на специфичность реакции в отношении 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9С и 10 экзонов гена. Обнаружено, что замена Taq-полимеразы на Pfu-полимеразу, добавление ДМСО не приводит к амплификации 7–8 экзонов гена TBX1.