Разработка поляризационного флуороиммуноанализа для определения фторхинолонов с использованием флуорофора 5-ДТАФ

Аннотация

В работе осуществлен синтез трейсеров – меченных флуоресцентной меткой 5-ДТАФ аналогов фторхинолонов, применяемых в животноводстве и птицеводсте. Изучена кинетика связывания синтезированных трейсеров с широким кругом моно- и поликлональныых антител. Проведен отбор перспективных для дальнейших исследований пар трейсер-антитело, на основе которых разработана методика поляризационного флуоресцентного иммуноанализа (ПФИА) для определения фторхинолонов – современного класса антибактериальных препаратов. Анализ основан на конкурентном взаимодействии с антителами содержащегося в пробе анализируемого фторхинолона и трейсера – меченного флуоресцентной меткой ДТАФ фторхинолона. Образование иммунного комплекса регистрируется по степени поляризации флуоресценции для плоскополяризованного возбуждающего света, различающейся у свободного и связанного с антителами трейсера. Оптимизированы условия проведения анализа, обеспечивающие минимальный предел обнаружения и требуемую точность детекции. Разработанный ПФИА характеризуется пределом обнаружения 35 нг/мл и диапазоном определяемых концентраций 35-2500 нг/мл, что удовлетворяет требованиям санитарно-гигиенического контроля. Методика апробированадля определенияантибиотиков моксифлоксацина и данофлоксацина в коровьем молоке. Экспрессность и методическая простота предлагаемого анализа обуславливают его эффективность как средства скринингового контроля безопасности пищевых продуктов