Разработка тест-системы для определения фторхинолонов методом ПФИА в объектах окружающей среды
Аннотация
Составлен аналитический обзор литературы, в котором рассмотрены антибактериальные препараты класса фторхинолонов и современные методы их анализа. Особое внимание уделено поляризационному флуоресцентному анализу и методам получения иммунореагентов.
Разработаны методы получения иммунореагентов для ПФИА. Осуществлен синтез 7(10)-замещенных аналогов применяемых на практике пефлоксацина и левофлоксацина, на основе которых получены трейсеры – меченые флуоресцентной меткой этилентиокарбамил флуоресцеином аналоги фторхинолонов. Выделены и проанализированы поликлональные антитела, полученные иммунизацией кролика конъюгатом фторхинолона с белком.
Изучена кинетика связывания синтезированных трейсеров с широким кругом моно- и поликлональныых антител. На основе отобранных пар трейсер-антитело разработана методика поляризационного флуоресцентного иммуноанализа для групп-специфичного определения фторхинолонов в объектах окружающей среды.
Оптимизированы условия проведения анализа, обеспечивающие минимальный предел обнаружения и требуемую точность детекции. Разработанный ПФИА характеризуется пределом обнаружения 28 нг/мл и диапазоном определяемых концентраций 50-5000 нг/мл, что удовлетворяет требованиям санитарно-гигиенического контроля. Методика апробирована для определения ципрофлоксацина в коровьем молоке.
Разработаны методы получения иммунореагентов для ПФИА. Осуществлен синтез 7(10)-замещенных аналогов применяемых на практике пефлоксацина и левофлоксацина, на основе которых получены трейсеры – меченые флуоресцентной меткой этилентиокарбамил флуоресцеином аналоги фторхинолонов. Выделены и проанализированы поликлональные антитела, полученные иммунизацией кролика конъюгатом фторхинолона с белком.
Изучена кинетика связывания синтезированных трейсеров с широким кругом моно- и поликлональныых антител. На основе отобранных пар трейсер-антитело разработана методика поляризационного флуоресцентного иммуноанализа для групп-специфичного определения фторхинолонов в объектах окружающей среды.
Оптимизированы условия проведения анализа, обеспечивающие минимальный предел обнаружения и требуемую точность детекции. Разработанный ПФИА характеризуется пределом обнаружения 28 нг/мл и диапазоном определяемых концентраций 50-5000 нг/мл, что удовлетворяет требованиям санитарно-гигиенического контроля. Методика апробирована для определения ципрофлоксацина в коровьем молоке.