Совершенствование метода обнаружения РНК EV-D68 человека с применением полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
Аннотация
ЭНТЕРОВИРУСЫ, EV-D68, ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ,
ТЕСТ-СИСТЕМА, ПЛАЗМИДА
Целью данной работы было совершенствование метода обнаружения РНК EV-D68 человека с применением ПЦР в режиме реального времени. Для проведения работы применялись такие методы как ПЦР в режиме реального времени, метод электрофореза, метод полувложенной ПЦР, секвенирование по Сэнгеру, клонирование в плазмидных векторах. В ходе эксперимента был адаптирован метод обнаружения РНК EV-D68 человека с применением ПЦР в режиме реального времени. За основу был взят раннее разработанный протокол ученых Ikuse et al. Подобран оптимальный метод выделения нуклеиновых кислот (НК) и состав реакционной смеси. На основе плазмидного вектора был разработан положительный контрольный образец.По результатам эксперимента был усовершенствован метод обнаружения EV-D68 за счет адаптации оптимизации состава реакционной смеси и получения положительного контрольного образца. Также собрана коллекция положительных образцов EV-D68 и собраны последовательности фрагмента генома, кодирующего вирусный белок VP1.
ТЕСТ-СИСТЕМА, ПЛАЗМИДА
Целью данной работы было совершенствование метода обнаружения РНК EV-D68 человека с применением ПЦР в режиме реального времени. Для проведения работы применялись такие методы как ПЦР в режиме реального времени, метод электрофореза, метод полувложенной ПЦР, секвенирование по Сэнгеру, клонирование в плазмидных векторах. В ходе эксперимента был адаптирован метод обнаружения РНК EV-D68 человека с применением ПЦР в режиме реального времени. За основу был взят раннее разработанный протокол ученых Ikuse et al. Подобран оптимальный метод выделения нуклеиновых кислот (НК) и состав реакционной смеси. На основе плазмидного вектора был разработан положительный контрольный образец.По результатам эксперимента был усовершенствован метод обнаружения EV-D68 за счет адаптации оптимизации состава реакционной смеси и получения положительного контрольного образца. Также собрана коллекция положительных образцов EV-D68 и собраны последовательности фрагмента генома, кодирующего вирусный белок VP1.